【使用上海博迅实业有限公司医疗设备厂超净工作台实施子宫摘除术净化icr小鼠的研究】,上海博迅-国际云顶yd4008

为了建立spf级远交系icr小鼠种群。使用超净工作台实施子宫摘除术净化小鼠, 结果:使用上述方法成功剖腹孕鼠20只, 得到净化小鼠140只, 育成小鼠120只, 检测各项指标符合spf级标准。结论:在普通环境中使用超净工作台实施子宫摘除术净化icr小鼠, 是建立spf级种群唯一经济有效的方法。

icr远交系小鼠引自日本国立肿瘤研究所, 属瑞士种。该鼠具有繁殖水平高、生产周期短、生长发育快、体型适中、对环境及饲喂适应性强等特点, 广泛应用于药物评价、毒性试验和生物医学研究等领域。随着生命科学的不断发展, 对实验动物提出了高标准严要求, 普通级实验动物只能用于教学或预实验, 科研用小鼠和大鼠必须达到清洁级 (排除动物传染病病原体和对实验干扰的病原体) 。青海省实验动物中心为满足省内需要, 于2002年由上海实验动物种子中心引进spf (无特定病原体) 级icr小鼠, 降为清洁级饲养在屏障系统中, 至今生产供应的数量达10万余只, 是目前用量最多的一种标准化清洁级实验动物。在保种和繁育生产过程中, icr小鼠的微生物质量控制十分重要, 我们在2005—2006年间, 在超净工作台内进行了剖腹产净化icr小 鼠的实验, 结合生物净化层流柜饲养技术, 有效地提高和保证了小鼠 微生物质量, 特别是在动物种群受细菌、病毒、寄生虫污染时立即全 部淘汰, 及时挽救、补充和重新建立spf级种群, 避免反复引种造 成人力、时间、物力及财力的损失和浪费, 同时避免运输过程中的污 染, 结果表明使用本途径是维护和建立spf级icr小鼠群种群唯一经济有效的 办法, 填补了青海省实验动物净化工作空白, 为提高我省实验动物质量 奠定基础, 缩短与先进省市的差距。现将结果报告如下:

1材料和方法

1.1 实验室和设备

清洁级动物实验室、超净工作台、生物净化层流柜、隔水式恒温水浴锅、手术器械、消毒缸等。

实验室经2%过氧乙酸喷雾消毒, 开启空气净化系统, 在静态情况下运转2d。手术前lh开启超净工作台紫外线灯, 开启生物净化层流柜后一直保持于工作状态。手术器械、止血纱布棉球等物品经121℃, 35min高压蒸汽灭菌。

1.2 保姆icr小鼠

为2002年从上海实验动物种子中心引进的 spf级icr小鼠, 合格证号:no 0024361, 交配时间比剖腹产icr小鼠提前3~4d。

1.3 剖腹的icr小鼠

来自本中心普通级icr小鼠, 饲养于普通环境, 交配时间比spf级icr小鼠延迟3~4 d, 交配后第2d提出雄鼠, 雌鼠单独饲养。

1.4 剖腹取仔方法

到预产期的孕鼠 (交配后20 d) , 断颈椎处死后, 立即用2%过氧乙酸浸泡2~3s, 然后置于超净工作台固定、剖腹, 用无菌止血钳夹住近肛门的子宫颈, 再用无菌剪从止血钳的肛门一侧剪断子宫, 取出子宫后, 置2%过氧乙酸浸泡1~2s, 快速切开子宫, 取出幼仔, 用无菌纱布将幼仔全身擦试干净, 擦去口、鼻部的羊膜、羊水, 切断脐带, 至体色由紫色转为鲜红色, 能够自由呼吸为止[1,2]。

1.5 代乳

在剖腹产所得的活幼仔中, 每只孕鼠的幼仔取6~8只, 用无菌运输盒转入生物净化层流柜中, 用spf级icr小鼠保姆代乳, 21d离乳, 然后将保姆鼠移出层流柜处死。

1.6 微生物检测

在1月龄和2月龄时, 随机抽取剖腹产小鼠按spf级动物质量标准进行微生物和寄生虫检测, 以后每季度检测一次。

2 结果

2.1 剖腹净化到扩大生产

此次剖腹净化icr小鼠共繁育成功20只孕鼠, 成活幼仔120只, 目前扩大成♀种180只, ♂种90只的生产种群, 月供600~900只, 生长繁育状况正常。

2.2 质量检测结果

按照实验动物国家标准要求, spf级动物应排除的病毒6种:小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒、大鼠细小病毒rv株、大鼠细小病毒h-1株、大鼠冠状病毒/大鼠泪眼腺病毒;细菌4种:嗜肺巴氏杆菌、肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌;寄生虫2种:鞭毛虫、纤毛虫[3]。经实验室检测, 病毒、细菌、寄生虫均为阴性, 符合我国spf级动物质量标准[3]。

3 讨论

3.1 应用超净工作台和生物净化层流柜, 在开放环境中实施子宫摘除术净化小鼠, 能够建立和维护spf级实验动物种群。由于超净工作台、生物净化层流柜的体积小、耗能低、易维护, 投入少量资金就能开展实验动物净化工作, 此项技术的应用, 避免了资金浪费, 减少反复引种和运输的污染, 最终解决就地开展实验动物净化的难题, 该项技术已应用到实验动物中心的实际工作中, 收到良好效果。

3.2 由于环境条件是保证实验动物质量的关键, 因此, 首先对静态状态下设备内外环境进行检测, 制定合理有效的微生物寄生虫控制措施和剖腹产无菌操作规程, 并且定期抽检动物的微生物和寄生虫指标。通过实验观察还发现, 由于青海气候干燥, 饲养环境湿度为30%, 可以通过使用加湿器使湿度达到规定的40%, 是实际工作中应引起注意的一个问题。